• Modèle de spranger

    by  • February 14, 2019 • Uncategorized

    Le défi secondaire avec l`antigène est généralement associé à la réexpansion des populations de lymphocytes T spécifiques à l`antigène (Klebanoff et al., 2006). Nous avons donc examiné le modèle des réponses immunitaires secondaires dans les modèles GEM respectifs qui avaient des tumeurs induites suite à l`établissement de la mémoire spécifique au SIY. Comme on pouvait s`y attendre, on a détecté une réponse de lymphocytes T spécifique à la SIY (6 – 7 fois) dans la rate de souris immunisées BP-SIY après induction tumorale, évaluée par l`ELISPOT IFN-γ (figure 3A). Toutefois, aucune expansion secondaire n`a été observée dans les cohortes BPC-SIY (figure 3A). Des résultats similaires ont été observés à l`aide d`une analyse cytométrique au pentamère et au débit de la Siy-KB comme mesure des fréquences des lymphocytes T (figure 3b – D). Lors de l`évaluation de la fréquence des lymphocytes T réactifs à la SIY dans la rate ainsi que du ganglion lymphatique drainant la tumeur (TdLN), nous n`avons pas observé de différences significatives à l`exception d`une augmentation des cellules positives au Pentamer dans le TdLN de tumeurs BP-SIY immunisées souris porteuses (figure S2C). Ces données indiquent que les tumeurs positives de la β-caténine (BPC-SIY) ne supportent pas la réexpansion d`une réponse de cellules T de mémoire spécifique à la tumeur. Pour que le contrôle de la croissance tumorale se produise par l`intermédiaire de cellules T 2C transférées adoptivement ou d`un effecteur endogène spécifique de SIY et de cellules T, nous avons envisagé que le contact direct des cellules tumorales serait nécessaire. Afin de poursuivre cette question, une approche d`imagerie intra-vitale (Schietinger et coll., 2013) a été adaptée au modèle de mélanome GEM. Les souris BP-SIY et BPC-SIY ont été intercroisées avec des souris reporter YFP, ce qui a permis la visualisation des cellules transformées. L`application TAM sur le flanc des souris a été réalisée de telle sorte que l`implantation chirurgicale de l`appareil de fenêtre pourrait être installée au-dessus de la tumeur.

    L`implantation sécurisée du cadre permettait l`imagerie séquentielle des mêmes lésions tumorales au cours de plusieurs jours. Les souches de souris suivantes ont été de bons cadeaux de collaborateurs et ont été utilisées pour générer les modèles utilisés dans cette étude: Tyr: cre-ER (doué par Lynda Chin), loxP-BrafV600E (aimablement fourni par Martin MacMahon), loxP-PTEN (fourni par Tak Mak), loxP-CAT-STA ( fournies par Fotini Gounari), loxP-Rosa-SIY et loxP-Rosa-YFP (Jackson Laboratories, souche 006148) (Bosenberg et coll., 2006; Dankort et coll., 2009; DuPage et coll., 2012; Gounari et coll., 2002; Sirma Ekmekci et coll., 2012; Spranger et coll., 2015). Le génotypage a été effectué comme décrit précédemment (Spranger et coll., 2015), les souris ont été utilisées à 6 – 12 semaines d`âge et le sexe apparié et reandomisé dans les groupes de traitement. les souris TCR-TG de 2C ont été maintenues en tant que source de cellules de T + T spécifiques de SIY (Manning et coll., 1997) et RAGN12-F ont été obtenues des fermes Taconic en tant qu`hôtes pour générer des lignées cellulaires tumorales.

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